武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（4
elisa试剂盒
武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6. 温育：操作同2。
7. 洗涤：操作同4。
8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B050μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
6．酶免疫测定
酶免疫测定（enzymeimmunoassay）可分为均相（homogenous）和非均相（heterogenous）两种类型。在均相E0IA中可不需进行游离的和结合的标记物的分离而直接测定标记物。例如在某种条件下，抗原抗1体反应后形成的酶标记抗原抗1体复合物中的酶失去其对底物作用的活力，因而测出的酶活力直接反映游离的酶标记物。均相E0IA在临床检验中较少应用。确定抗1生素毒性水平后，使用毒性浓度2～3倍浓度的抗1生素的培养液培养细胞2～3代。非均相E0IA需行游离的和结合的标记物的分离。如前所述，固相载体可用作一种分离手段。这种固相酶免疫测定方法在1971年1初建立时称为酶联免疫吸附剂测定（enzymelinked immunosorbent assay），简称ELISA，在国内有译作酶联免疫吸附试验的，虽然含义不完全确切，但已习用。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。4敏感性在测定血1清中某一物质的含量时，化学比色法的敏感度为mg/ml水平，酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml，免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。
双抗1体夹心法测抗原的另一注意点是类风1湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗1体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗1体夹心法检测的血1清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗1体和酶标抗1体结合，表现出假阳性反应。另外，还应保证样本不含NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。采用F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。双抗1体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。
双抗1体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
（作者： 来源：）
