武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。使用基于的荧光显微分析技术,替代传统的质谱绘图技术,研究人员使用13993种,定位了细胞间隔和亚结构内的12003种蛋
亚细胞定位服务技术
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。使用基于的荧光显微分析技术,替代传统的质谱绘图技术,研究人员使用13993种,定位了细胞间隔和亚结构内的12003种蛋白质,共计完成了13个主要细胞器的蛋白质组学研究。

分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉(直径为1 μm),加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中,边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振荡混匀。基因枪GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因枪,进行轰击,之后放置25℃避光过夜培养,使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
研究者首先通过荧光成像技术来定义细胞器和亚细胞区的蛋白质组信息。而在对细胞内不同隔室间信号传递的分析中发现,大型细胞隔室的作用非常突出,特别是跟分泌途径相关,或者不同隔室之间信号传递有关。通过测定30个亚细胞结构的蛋白定位,在细胞图谱中定义了13个亚细胞蛋白质组以及分泌蛋白质的蛋白质组,通过荧光显微镜在细胞图谱中注释的亚细胞结构。研究人员以蛋白质图谱中的蛋白空间信息对蛋白的互作关系进行验证(图5)。结果表明,在质膜上的蛋白拥有更多的机会与质膜、高尔基体、囊泡、黏着斑、细胞接头及细胞溶质中的蛋白发生直接的互作关系。
亚细胞定位是指某种蛋白或某个基因表达产物在细胞内的具体存在部位,包括细胞核、细胞质和细胞膜等部位。传统的实验方法有,利用一些荧光蛋白如GFP、YFP,通过其在激光照射下发出的绿色或黄色荧光,从而准确确定编码蛋白的定位。如果面对质谱打出来很多蛋白,传统的实验方法显得十分乏力。注意:1、不建议将爬片泡酸后高压灭菌,首先玻片太薄高压容易使玻片变形,其次湿灭很容易使玻片上留下水渍影响细胞贴壁。如果能利用生物信息学手段基于一些算法如机器学习等开发的方法进行亚细胞定位预测分析辅助于实验,这样就能省时省力节约成本。
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