Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)是目前常使用的改良式Eagle's培养基。DMEM与MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。主要用于生长的细胞，分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种。DMEM含更高浓度的NaHCO3，要用10%的CO来平衡，当然也可以在较低CO浓度下使用。DMEM-高糖（标准型）更适合
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Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)是目前常使用的改良式Eagle's培养基。DMEM与MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。主要用于生长的细胞，分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种。DMEM含更高浓度的NaHCO3，要用10%的CO来平衡，当然也可以在较低CO浓度下使用。DMEM-高糖（标准型）更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的培养，也可用于杂交瘤中瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，应该仔细观察每种细胞的状态，抱团并不一定代表不好：1，若细胞轮廓清晰，可看清楚一个个的细胞，像葡萄一样，一串串的，就是状态好的，说明细胞在分裂。2，但大部分细胞抱团不是一件好事！如果轮廓消失，出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差，就是细胞死了。葡萄状和抱团，在镜下其实很容易区别。抱团死的细胞可以看到细胞碎片。
细胞培养时可能导致衰老的原因：1.细胞传代次数比较多，一定要控制细胞传代次数！大量扩增细胞，将细胞进行冻存，在必要的时候重新复苏。2.胰酶消化时间太长，胰酶消化时间过长容易导致细胞状态不佳以及胞质疏松;细胞传代时需要留意胰酶消化的时间。消化过度，在消化细胞时会对细胞的表面蛋白有较强的损伤，所以消化的时间不能过长，建议使用合适浓度和pH值的消化酶，否则会导致细胞衰老和分化。
在悬浮培养模式下，细胞可以通过不同的容器进行扩大：摇瓶、玻璃生物反应器、不锈钢生物反应器、培养袋及一次性搅拌容器。有报道采用HEK293T细胞进行扩增、转染、慢病毒生产可以用一次性的生物反应器实现50L的规模。利用悬浮细胞瞬时转染大规模生产慢病毒是可行的，并且显示出良好的产量。但是，在转移到工业生产之前，该技术还需要进一步完善。优化的主要瓶颈是转染过程本身，它需要大量质粒DNA，从而使生产过程极其昂贵。
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