冻存和复苏的原则:慢冻快融。当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶,相反,结晶就大,大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破且裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。
公司坚持以满足顾客需求为目的,通过设计改进,生产绿色环保型的科学仪器及配件,公司对产品生产
冰箱冷冻管
冻存和复苏的原则:慢冻快融。当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶,相反,结晶就大,大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破且裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。
公司坚持以满足顾客需求为目的,通过设计改进,生产绿色环保型的科学仪器及配件,公司对产品生产和服务全过程的重要环境因素进行控制,对相关方环境行为施加影响,有效利用能源,资源,减少生产活动对环境的影响,持续改进公司的业绩,确保质量/环境管理体系有效运行,促进人和自然的和谐发展。
主要技术——冻存技术:1.液氮法:目前,细胞冻存尤为常用的技术是液氮冷冻保存法,主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分,减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲l基亚砜作保护剂,这两种物质分子量小,溶解度大,易穿透细胞,可以使冰点下降,提高细胞膜对水的通透性,且对细胞无明显毒性。
玻璃化法:玻璃化保存(Vitrfication)是一种超l速冷冻方法。它是以极快的速度冷冻细胞,使细胞内外的游离水迅速形成玻璃样物质,而不形成冰晶。这种保存方法既避免了由于慢速降温时导致的盐浓度升高,又防止了由于冰晶形成造成的物理损伤,可获得较高存活率。玻璃化首先由Luyet在1937年提出,他认为生命是生物活l体系统的原子或其他结构元的一种特殊排列,并且轻微的排列位置扰动就会破坏平衡从而导致死l亡,而结冰时的驱动力会破坏这种特殊的排列,这就是冰冻死l亡的原因。玻璃化比冻l结固化方法引起的结构变化要小,因而是一种较理想的低温保存途径。
低温保护剂的应用:在细胞冻存时加入温保护剂,能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓过程,能使细胞内水分在冻l结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。细胞冻存方法:预先配制冻存液:含 20%血l清培养基;10% DMSO;取对数生长期细胞,经胰酶消化后,加入适量冻存液,用吸管吹打制成细胞悬液(1~5X10细胞/ml);加入1ml细胞于冻存管中,密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。细胞复苏方法:(1) 从液氮中取出冷冻管,迅速投入37~38 C水浴中,使其融化(1 min左右)。(2) 5 min内用培养液稀释至原体积的10倍以上。(3)低速离心10 min。(4)去上清,加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。
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