亲和柱亲和层析原理介绍
组氨酸是具有杂环的氨基酸，每个组氨基酸含有一个咪唑基团，这个化学结构带有很多额外电子，对于带正电的化学物质有静电引力，亲和层析是利用这个原理来进行吸附的，亲和配体（也就是填料）上的阳离子（一般是镍离子）带正电对组氨酸有亲和作用。组氨酸标签是原核表达载体上6个组氨酸的区段，这个标签在ph8.0时不带电，对蛋白质的分泌，折叠，功能基本上无影响.能高度亲和镍离子，用于蛋白质的亲和纯化.
亲和柱适用注意事项
(1) 呕吐毒素对人体有害，应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次酸钠浸泡过夜。
(2) 不要使用过有效期的亲和柱。
(3) 亲和柱应在2~8℃保存。不要冷冻。
(4) 使用前，亲和柱需至少提前半小时回温至室温(25℃左右)。
(5) HPLC液相测定值、试剂盒计算值接近zui高检出值时，样本的实际含量可能大于柱容量而造成流穿，建议减少上样体积重新过柱。
(6) 称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议不少于10g样。
亲和柱净化步骤
注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!
----3mL柱管取出上方堵头，减去上堵头螺纹下突出部分，插回柱子上，另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象，不影响亲和柱的使用);
----准确移取上述混匀滤液，肝素亲和柱报价，注入针筒中，调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过亲和柱;
----用20mL 水冲洗柱子(对于饲料及玉米加工副产品等颜色较深的样液，呕吐毒素亲和柱报价，先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗，再用10 mL 10%水冲洗柱子，之后用10mL水冲洗柱子。)，流速1秒/滴，亲和柱报价，弃去流出液，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体;
----准确加入1.5mL(色谱级)洗脱，流速自然重力，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液，进行相关测定。
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